人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒

【简单介绍】

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【详细说明】

人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒

用途:定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中 人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒含量

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人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒

操作方法:

一、双抗体夹心法

1.包被:用0.05MPH9.短妓嵫伟被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。

2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-“号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

二、间接法

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;

2.次日洗涤3次;

3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;

4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;

5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;

6.最后一遍用DDW洗涤。

其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒

标本收集: 血清:全血标本于室温放置2小时或4℃后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。血浆:抗凝剂推荐使用EDTA,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂标本。其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20/-80℃电冰箱内,避免反复冻融,6个月内进行检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 如果样本中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做预实验,以确定稀释倍数)
酶标仪(450nm波长滤光片)高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水。

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